Meta-analysis of the frequency of JAK2 in primary myelofibrosis according to the detection method used / Metaanálisis de la frecuencia de JAK2 en mielofibrosis primaria según la técnica de detección

Abstract Background and objective: in the global scientific literature, the frequency of JAK2 is highly heterogenous in chronic myeloproliferative neoplasms. The objective of this study was to analyze the prevalence of the JAK2 mutation in primary myelofibrosis (PMF) and compare it according to the detection method used, from 2007-2018. Materials and methods: a systematic review with meta-analysis, using 21 searches in three multidisciplinary databases. The PRISMA guideline phases of identification, screening, selection and inclusion were applied. Reproducibility and evaluation of the methodological quality were ensured. The analyses were based on frequencies and meta-analysis for the prevalence of the mutation with its 95% confidence interval. Results: twenty-nine studies with 744 patients were included, mainly from Korea, Brazil and China. The most commonly used technique was AS-PCR, and the prevalence of JAK2 with this technique ranged from 33.3 to 71.4%; with real-time PCR ranging from 42.9 to 77.3%, sequencing from 14.3-57.4%, and ARMS from 36.4-83.3%. The prevalence of JAK2 showed no statistically significant differences according to the type of diagnostic test used. Conclusion: high frequencies of the JAK2V617F mutation are seen in PMF, which shows that this entity should not be diagnosed solely based on clinical and hematological characteristics, but also on the patients' genetic screening.

Resumen Antecedentes y objetivo: en la literatura científica mundial la frecuencia de JAK2 presenta una alta heterogeneidad en las neoplasias mieloproliferativas crónicas. El objetivo de esta investigación fue analizar la prevalencia de la mutación JAK2 en mielofibrosis Primaria (MFP) y compararla según la técnica de detección en los años 2007-2018. Material y métodos: revisión sistemática con metaanálisis, usando 21 búsquedas en tres bases de datos multidisciplinarias. Se aplicaron las fases de identificación, tamización, elección e inclusión de la guía PRISMA. Se garantizó reproducibilidad y evaluación de la calidad metodológica. Los análisis se basaron en frecuencias y metaanálisis para la prevalencia de la mutación con su intervalo de confianza de 95%. Resultados: se incluyeron 29 estudios con 744 pacientes, los cuales provienen principalmente de Corea, Brasil y China. La técnica más empleada fue AS-PCR, las prevalencias de JAK2 con esta técnica oscilaron entre 33.3 y 71.4%; con PCR en tiempo real entre 42.9 y 77.3%, con secuenciación de 14.3-57.4% y en ARMS de 36.4-83.3%. La prevalencia de JAK2 no presentó diferencias estadísticamente significativas según el tipo de prueba diagnóstica utilizada. Conclusión: se evidencian altas frecuencias de la mutación JAK2V617F en MFP, lo que evidencia que el diagnóstico de esta entidad no debe realizarse únicamente por características clínicas y hematológicas sino también por la tamización genética de los pacientes.

Panorama genómico y citogenético de las leucemias mieloides agudas con anormalidades genéticas recurrentes / Genomic and cytogenetic panorama of acute myeloid leukemias with recurrent genetic abnormalities

Resumen Las leucemias mieloides agudas son un grupo heterogéneo de enfermedades caracterizadas por un aumento de células inmaduras. Inicialmente, fueron clasificadas teniendo en cuenta datos morfológicos; sin embargo, con las nuevas herramientas diagnósticas se establece una clasificación más completa que comprende grupos de alteraciones cromosómicas y mutaciones genéticas a las cuales se dirige el tratamiento. Se asocian con mutaciones genéticas adicionales que, en la mayoría de los casos, confieren características desfavorables a los pacientes y en muchas ocasiones se traducen en bajas tasas de remisión completa y recaídas frecuentes.

Abstract Acute myeloid leukemias are a heterogeneous group of diseases characterized by an increase in immature cells. Initially, acute myeloid leukemias were classified taking into account morphological data; however, with new diagnostic tools a more complete classification is established and comprising groups of chromosomal alterations and genetic mutations to which treatment is directed. Acute myeloid leukemias are associated with additional genetic mutations, which, in most cases, confer unfavorable characteristics to patients and often result in low rates of complete remission and frequent relapses.

Systematization of analytical studies of polycythemia vera, essential thrombocythemia and primary myelofibrosis, and a meta-analysis of the frequency of JAK2, CALR and MPL mutations: 2000-2018.

BACKGROUND: Research into Philadelphia-negative chronic myeloproliferative neoplasms is heterogeneous. In addition, no systematization of studies of polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET) or primary myelofibrosis (PMF) have been carried out. The objective of this review is to characterize studies on BCR-ABL1-negative chronic myeloproliferative neoplasms and to compare the frequency of JAK2, MPL and CALR mutations in PV, ET and PMF. METHOD: A systematic review of the scientific literature was conducted, as was meta-analysis with an ex-ante selection of protocol, according to phases of the PRISMA guide in three interdisciplinary databases. To guarantee reproducibility in the pursuit and retrieval of information, the reproducibility and methodological quality of the studies were evaluated by two researchers. RESULTS: Fifty-two studies were included, the majority having been carried out in the United States, China, Brazil and Europe. The frequency of the JAK2V617F mutation ranged from 46.7 to 100% in patients with PV, from 31.3 to 72.1% in patients with ET, and from 25.0 to 85.7% in those with PMF. The frequency of the MPL mutation was 0% in PV, from 0.9 to 12.5% in ET, and from 0 to 17.1% in PMF. The CALR mutation occurred at a frequency of 0.0% in PV, whereas in ET, it ranged from 12.6 to 50%, and in PMF, it ranged from 10 to 100%. The risk of this mutation presenting in PV is 3.0 times that found for ET and 4.0 times that found for PMF. CONCLUSION: Given the specificity and reported high frequencies of the JAK2V617F, MPL and CALR mutations in this group of neoplasms, the diagnosis of these diseases should not be made on clinical and hematological characteristics alone but should include genetic screening of patients.

Determinación de intervalos biológicos de referencia para adultos en el equipo hematológico BC-5000 de la Escuela de Microbiología de la Universidad de Antioquia, Medellín 2017 / Determination of reference biological intervals in a hematology analyzer BC-5000 of the Microbiology School of the University of Antioquia, Medellin 2017

RESUMEN Introducción: los valores del hemograma en adultos pueden variar de acuerdo con factores como el origen étnico, la edad, el sexo y la altura sobre el nivel del mar, por lo cual es indispensable conocer intervalos biológicos asociados a nuestra población. Por esto el objetivo de nuestro estudio fue determinar intervalos biológicos de referencia (IBR) para adultos en un equipo hematológico BC-5000. Metodología: estudio descriptivo transversal con 111 donantes entre 18 y 62 años de un banco de sangre de Medellín. Se realizó un hemograma, proteína C reactiva y ferritina. Se calcularon los IBR siguiendo las recomendaciones de la Federación Internacional de Química Clínica. La comparación de los IBR según sexo se realizó con la prueba T-student. Resultados: los IBR calculados mediante la fórmula X ± (DS * 1,96) mostraron diferencias estadísticamente significativas entre hombres y mujeres para el recuento de la mayoría de los parámetros. Se obtuvieron medias estadísticas mayores en mujeres para el recuento de leucocitos y plaquetas, recuentos absolutos y relativos de algunas células blancas, volumen plaquetario medio (VPM) y plaquetocrito (PCT). Discusión: la presencia de andrógenos en el sexo masculino, inductores del sistema eritropoyético, así como los estrógenos y el período menstrual, supresores del mismo, pueden explicar los valores menores en el recuento eritrocitario, en los rangos de hemoglobina, hematocrito y glóbulos rojos en las mujeres. Las altas cargas de estrógenos e interleucinas 6 y 10 en las mujeres amplían la vida media de células como linfocitos, explicando la diferencia en el recuento leucocitario a expensas de linfocitos encontrados en el presente estudio.

SUMMARY Introduction: The adult hemogram values can vary according factors such as ethnic origin, age, sex and level above the sea, whereby it is essential to know the biological intervals associated to our own population. Therefore, the objective of our study was to determine biological reference intervals (BRI) for adults with the hematological equipment BC-5000. Methods: This is a transversal descriptive study with 111 blood bank donors from Medellín, between 18 62 years old. Hemogram, Creactive protein and ferritin were done. The BRI were calculated according to the recommendations of the International Federation of Clinical Chemistry (IFCC), with the formula X ± (DS * 1, 96). BRI comparison according sex was carried out with the t-student test. Results: Calculated BRI by X ± (DS * 1, 96) formula, showed statistically significant differences (P < 0, 05) between men and women for count in most of the parameters. Higher statistical means were obtain in women for the count of leukocytes and platelets, absolute counts of some white cells, VPN y PCT. Discussion: The presence of androgens in the male sex, inductors of the erythropoiesis system, as well as the estrogens and menstrual period, suppressor of this system, can explain the lower values in the female erythrocyte count, the hemoglobin, hematocrit and red cell lower ranges. The high estrogen and interleukins 6 and 1 loads in women, drive the extended half-life of some cells like lymphocytes, that can explain the difference in leucocyte count found in the present study.

Calreticulina: aspectos moleculares y técnicas para su detección / Calreticulin: molecular aspects and techniques for its detection

Las neoplasias mieloproliferativas crónicas (NMPC) son enfermedades clonales caracterizadas por un aumento en el número de células maduras circulantes; estas incluyen: policitemia vera (PV), trombocitemia esencial (TE), mielofibrosis primaria (MFP), entre otras. Una de las principales características moleculares de estas tres entidades es la ausencia del gen de fusión BCR/ABL. La primera mutación relacionada directamente con estas neoplasias fue detectada en el gen JAK2; a partir de su descubrimiento, otras mutaciones en los genes del receptor de trombopoyetina (MPL) y calreticulina (CALR) han sido fuertemente relacionadas con la presentación de la enfermedad. La calreticulina es una proteína del retículo endoplásmico con diversas funciones a nivel celular como la homeostasis del calcio y la actividad de chaperona. Hasta la fecha se ha identificado un gran número de mutaciones en el gen CALR. La mayoría de ellas son inserciones y deleciones que generan cambios a nivel proteico con implicaciones importantes en el curso clínico y pronóstico de las neoplasias. Debido a su alta frecuencia y fuerte asociación con las NMPC, las mutaciones de CALR se incluyen como criterio mayor para el diagnóstico de estas entidades. Por este motivo, se han desarrollado varias técnicas encaminadas a la detección rápida, eficiente, sensible y especifica de esta mutación como: la secuenciación, el análisis de fragmentos y el análisis de fusión de alta resolución. El conocimiento e implementación de estas técnicas en los laboratorios clínicos constituye un avance importante para el diagnóstico y la evolución de los pacientes(AU)

Chronic myeloproliferative neoplasms (NMPC) are clonal diseases characterized by an increase in the number of mature circulating cells; these diseases include: polycythemia vera (PV), essential thrombocythemia (ET), primary myelofibrosis (MFP) among others. One of the main molecular characteristics of these three entities is the absence of the BCR/ABL fusion gene. The first mutation related to this group of neoplasms was detected in the JAK2 gene; since its discovery, other mutations in thrombopoietin receptor (MPL) and calreticulin (CALR) genes have been strongly related with the presentation of the disease. Calreticulin is an endoplásmic reticulum protein with different functions in the cell such as calcium homeostasis and the chaperone activity. To date, a large number of mutations have been identified in CALR gene most of them are insertions and deletions that generate changes in the protein that generate important implications in the clinical course and prognosis of neoplasms. Due to its high frequency and strong association with NMPC, CALR mutations are included as a major criteria for the diagnosis of these entities. For this reason, several techniques have been developed aimed at the rapid, efficient, sensitive and specific detection of this mutation as: sequencing, fragment analysis and high resolution fusion analysis. The knowledge and implementation of these techniques in clinical laboratories is an important advance for the diagnosis and in the evolution of patients(AU)

Análisis de metilación en pacientes con leucemia mieloide crónica en diferentes instituciones médicas de Medellín / Methylation analysis in patients with chronic myeloid leukemia in different medical institutions in Medellín

Fundamento: la leucemia mieloide crónica es una neoplasia mieloproliferativa crónica que se caracteriza por la presencia del cromosoma filadelfia. Para esta se ha diseñado como tratamiento los inhibidores de tirosin kinasa, que genera en los pacientes una respuesta hematológica, citogenética y molecular. Esta enfermedad se caracteriza por presentar tres fases clínicas que son producto de la acumulación de daños tanto genéticos representados por mutaciones puntuales y alteraciones en el cariotipo; y cambios epigenéticos en genes tales como ABL-1, OSCP1, PDLIM4, NPM2, ER y p15. Objetivo: describir los patrones de metilación de seis genes en pacientes con leucemia mieloide crónica en distintas fases de la enfermedad tratados con algún ITK´s o en su defecto con hidroxiurea en dos hospitales de Medellín. Métodos: se realizó un estudio analítico trasversal, en el que se recolectaron 34 muestras a conveniencia de pacientes con leucemia mieloide crónica. Para hacer el análisis de estas muestras se usó una PCR específica de metilación. Los datos analizados no se distribuyeron de forma normal, por lo que se realizaron pruebas no paramétricas como U de Man Whitney y test exacto de Fischer, con una significancia de 0,05. Resultados: se encontró diferencias de estadísticas significativas en los datos del hemograma de ambas fases de la enfermedad, también se encontró una alta frecuencia de genes metilados en fase acelerada. La metilación de p15, ABL-1, ER son independiente de la fase de la enfermedad. En los pacientes tratados con hidroxiurea se observó una metilación del 100 % para los genes NPM2, OSCP1 y PDLIM4 este comportamiento no se observó en los individuos tratados con ITK´S, no obstante, para aquellos pacientes que desarrollaron resistencia a los ITK´s se observó un porcentaje de metilación mayor en los genes OSCP1, ABL-1 y PDLIM4. Conclusiones: la metilación en los genes PDLIM4 y OSCP1, puede asociarse con pronóstico desfavorable, ya que puede estar relacionado con la progresión de fase crónica a acelerada y el desarrollo de resistencia a los ITK´s.

Background: chronic myeloid leukemia (CML) is a chronic myeloproliferative neoplasm characterized by the presence of the Philadelphia chromosome. A specific treatment is designed as tyrosine kinase inhibitors (ITK's), which induces patients to have a hematologic, cytogenetic and molecular response. This disease is characterized by three clinical phases that result from the accumulation of genetic damage, both represented by point mutations and alterations in the karyotype; and epigenetic changes in genes such as ABL, OSCP1, PDLIM4, Npm2, ER and p15. Objective: to describe the schemes of six gens in patients with chronic myeloid leukemia in different stages of the disease and treated with some ITK in two hospitals in Medellín. Methods: a descriptive transversal study was conducted, in which 34 samples were collected at the convenience of patients with chronic myeloid leukemia (CML). To make the analysis of these samples methylation specific PCR was done. Results: statistical differences in blood count data from both phases of the disease was found, a high frequency of methylated genes in accelerated phase was also found. p15 methylation, ABL, ER are independent of the stage of the disease. In patients treated with hydroxyurea, methylation of 100 % for OSCP1 and PDLIM4 genes was observed and this behavior was not observed in individuals treated with ITK'S. In patients who developed resistance to ITK's however was observed a higher percentage of methylation in genes OSCP1 and PDLIM4. Conclusions: methylation in PDLIM4 and OSCP1 genes could be associated with poor prognosis possibly being associated with progression of chronic to accelerated phase and the development of resistance to ITK's.

Correlación entre la concentración urinaria de malondialdehído y daño en el ADN de personas expuestas a mercurio / Correlation between urinary concentration of malondialdehyde and DNA damage in people exposed to mercury

Objetivo: determinar si la magnitud del daño en el ADN se correlaciona con la concentración de malondialdehído (MDA) urinario en individuos expuestos ocupacionalmente a mercurio y en controles no expuestos. Metodología: se evaluaron 64 historias clínicas (32 de expuestos y 32 de controles) en los que se determinó la concentración urinaria de MDA y se hizo el ensayo cometa para detectar el porcentaje de ADN en la cola. Se compararon las concentraciones de MDA y las alteraciones en el cometa entre los grupos y se hizo una correlación entre estas variables. Resultados: hubo mayores concentraciones de MDA en los expuestos que en los controles (mediana 1,28 frente a 0,51 µmol/L, respectivamente), así como mayores daños en el ensayo cometa (mediana del porcentaje de ADN en cola: 27,37 frente a 0,31, respectivamente). Hubo mala correlación entre el MDA en la orina y el daño genético (r <0,11). Conclusión: no se pudo demostrar que a mayores concentraciones de MDA en la orina se presentara mayor daño genético, pero sí hubo mayor daño del ADN y concentraciones más altas de MDA en los expuestos que en los controles.

Objective: To determine whether the extent of DNA damage correlates with the concentration of malondialdehyde (MDA) in urine of individuals occupationally exposed to mercury. Methods: We evaluated 64 medical records (32 from exposed persons and 32 from unexposed controls). In both groups we analyzed the comet assay data (percentage of DNA in the tail), as well as the levels of MDA and mercury in the urine. We compared the MDA concentrations, and the changes in the comet assay between the groups and the correlation between these variables. Results: MDA concentrations were higher in exposed persons than in controls (median 1.28 vs. 0.51 µmol/L, respectively), and a corresponding damage was observed in the comet assay (median of DNA percentage in tail: 27.37 vs. 0.31, respectively). However, we found poor correlation between urinary MDA and genetic damage (r <0.11). Conclusion: No evidence was obtained indicating that higher concentrations of MDA in urine were related to additional genetic damage, but there were more DNA damage and higher concentrations of MDA in individuals occupationally exposed to mercury compared with unexposed people.

Hepcidina: su interacción con la hemojuvelina y su aporte en el diagnóstico de las enfermedades relacionadas con el metabolismo del hierro / Hepcidin: Interaction with Hemojuvelin and its Contribution in the Diagnosis of Diseases Related to Iron Metabolism

La hepcidina es una hormona peptídica, producida en el hígado y considerada unregulador del metabolismo del hierro. Su regulación está dirigida a la absorciónintestinal del hierro y a la función de la ferroportina dentro de la célula, a fin demantener un balance entre el consumo y las reservas de hierro. Esta hormona, a suvez, está regulada por procesos inflamatorios, estados de anemia ferropénica, actividadhematopoyética y algunas vías de señalización como SMAD, STAT y JAK. En estasvías interviene una proteína de membrana llamada hemojuvelina, la cual actúa comoun correceptor de la proteína morfogenética ósea, cuya función es inducir el gende transcripción de la hepcidina mediante la vía SMAD1/5/8-SMAD4. Debido a laasociación de la hemojuvelina con la expresión de la hepcidina y la relación de estaúltima con procesos inflamatorios y regulación del metabolismo del hierro, se hanpropuesto algunas técnicas para la determinación de ambas proteínas como Elisa,Dotblot, inmunoensayos y SELDI-TOF MS...

The hepcidin is a peptide hormone produced by theliver with anti-bacterial activity, is involved in regulationiron metabolism, making it possible to useit as another parameter to assess some entities relatedto disorders associated with iron metabolism.Hepcidin regulates intestinal absorption of ironlevel and the role of ferroportin in the cell, preventingeither iron overload or iron consumptionreserve, this is turn regulating for inflammatorystimuli, iron store, erythropoietic activity andsignaling patway SMAD,STAT and JAK; in thissignaling patway involved a membrane proteincalled hemojuvelin. The hemojuvelin acts as abone morphogenetic protein co-receptor, theyinduce hepcidin gene transcription through theSMAD1/5/8-SMAD4. Because of the associationsof hemojuveline with hepcidin expression andthe relationship of the latter with inflammatoryprocesses and regulations of iron metabolismhave been proposed some techniques for the determinationof both proteins as Elisa, Dotblot,Immunoassays and SELDI-TOF MS...

Células madre: generalidades, eventos biológicos y moleculares / Stem cells: general aspects, biological and molecular events

Las autorrenovación y la diferenciación son características de las células madre que varían entre los diferentes tipos celulares según el tejido en el que se encuentren y el microambiente que las rodee. En ambos procesos intervienen inhibidores del ciclo celular, genes implicados en rearreglos cromosómicos, proteínas del desarrollo esencial y vías de señalización específicas. La autorrenovación está regulada por diversos mecanismos, entre los cuales se destacan las vías Wnt, Notch y Hedgehog, y los factores BMI-1, p16Ink4a, ARF, NANOG, OCT3/4, SOX2, HOXB4 y sus páralogos. Los adelantos en el conocimiento de la biología de las células madre y de los mecanismos moleculares que regulan la autorrenovación y la diferenciación han convertido a estas células en una importante promesa para la investigación básica y aplicada.

Self-renewal capacity and differentiation are features of stem cells that vary among the different cellular types according to the tissue in which they reside and the surroundingmicroenvironment. Cellular cycle inhibitors, genes implied in chromosomal rearrangements, essential development proteins and specific signaling pathways intervene in these processes. Self-renewal is regulated by different mechanisms, the most important of which are the Wnt, Notch and Hedgehogpathways, and the factors BMI-1, p16Ink4a, ARF, NANOG, OCT3/4, SOX2, HOXB4 and their paralogs. Advancesin the knowledge of stem cells biology and of the molecular mechanisms that influence their selfrenewal and differentiation have made these cellsan important promise for both basic and applied research.